Newsletter – 26 de novembro 2024

Trabalho em pauta: On the interactions involving serine proteases obtained from Monacrosporium thaumasium (Ascomycota: Orbiliomycetes) and deoxyribonucleic acid (DNA): biological macromolecules in action

Autores: Lorena Souza Castro Altoé, Ethe de Araújo Costa, Gabriella Peterlini Tavares, Márcio Santos Rocha, José Humberto de Queiroz, Juliana Barbosa Coitinho Gonçalves, Suely Gomes de Figueiredo, Jackson Victor de Araújo

O presente artigo traz o estudo de serina-proteases de M. thaumasium ao interagir com dsDNA usando pinças ópticas, revelando o modo de ligação e a química física da interação. Estudos anteriores demonstraram que o fungo Monacrosporium thaumasium é eficiente no tratamento de nematoides gastrintestinais (GIN) de diversos animais domésticos. Além do uso no controle de nematoides, o M. thaumasium tem se destacado com potencial uso biotecnológico de enzimas extracelulares e seu fator de virulência. 

O primeiro passo foi adquirir o   fungo   nematófago Monacrosporium thaumasium (cepa NF34), que foi isolado, já a protease foi produzida de acordo com protocolo adaptado (Gradišar et al. 2005). Posteriormente, foi preparado o extrato enzimático, que foi então purificado parcialmente utilizando cromatografia de troca iônica, a quantificação de proteínas foi realizada utilizando o método de Bradford (1976), para acompanhar a purificação foi realizada eletroforese em gel de poliacrilamida. 

A determinação de atividade enzimática foi realizada com parada de reação usando ácido tricloroacético e o substrato foi a caseína. Um zimograma foi realizado para confirmar a atividade de protease. Ensaios enzimáticos variando valores de pH e temperatura a fim de se determinar os valores em que a enzima apresentou melhor atividade também foram realizados. Ensaios de pinça ótima foram realizados para verificar interação entre DNA e a enzima, o gel de agarose foi usado para confirmar essa interação. 

O valor de pH 9,0 foi onde se observou a melhor atividade enzimática e a temperatura foi de 70 ° C, o resultado da eletroforese em gel de poliacrilamida demonstrou que a enzima tem o peso molecular em torno de 40 KDa, corroborando com dados literatura.

Conclui-se que as serina-proteases ao interagirem com o dsDNA, modificam a flexibilidade da dupla hélice, essas enzimas se ligam fortemente ao dsDNA, apresentando um comportamento de cooperatividade positiva na forma de agregados ligados e tendem a neutralizar cerca de 100% da carga negativa presente na estrutura de fosfato da dupla hélice, resultando em complexos neutros de DNA-proteína. A caracterização é importante para elucidar os aspectos moleculares do mecanismo de ação desse tipo de proteína, o que pode trazer pistas sobre seu papel como agentes antipatógenos e, assim, contribuir para melhorar o conhecimento na utilização dessas macromoléculas biológicas para essa finalidade.

Confira o trabalho completo em: http://dx.doi.org/10.1007/s00203-023-03551-7

Resumo por: Geisiane Aparecida Mariano